उत्पादनहरू

प्रोटोम-वाइड फास्फोरिलेसन घटनाहरूको विश्लेषण प्रोटीन फास्फोरिलेसन नेटवर्कहरूको विशाल जटिलताको कारणले गर्दा अझै पनि एक प्रमुख विश्लेषणात्मक चुनौती हो।यस काममा, हामी Lys-N, Lys-C, र ट्रिप्सिनको पूरकताको मूल्याङ्कन गर्दछौं तिनीहरूको फस्फोप्रोटोमको विश्वव्यापी विश्लेषणमा योगदान गर्ने क्षमताको सन्दर्भमा।कम-pH बलियो केशन एक्सचेन्जको परिष्कृत संस्करण एन-टर्मिनली एसिटाइलेटेड, फास्फोरिलेटेड, र गैर-परिमार्जित पेप्टाइडहरू कुशलतापूर्वक अलग गर्न प्रयोग गरिएको थियो।तीन इन्जाइमहरूको संयोजन प्रयोग गरेर 1 मिलीग्राम प्रोटिनबाट 1% को गलत खोज दरको साथ कुल 5036 गैर-रिडन्डन्ट फस्फोपेप्टाइडहरू पहिचान गर्न सकिन्छ।हाम्रो डेटाले पत्ता लगायो कि विभिन्न प्रोटीजहरूसँग उत्पन्न गरिएको फस्फोपेप्टाइड डेटा सेटहरू बीचको ओभरल्याप मार्जिनल थियो, जबकि दुई समान रूपमा उत्पन्न ट्रिप्टिक डेटा सेटहरू बीचको ओभरल्याप कम्तिमा 4 गुणा बढी भएको पाइयो।यस तरिकाले, Lys-N र trypsin को समानान्तर प्रयोगले पत्ता लगाइएका फस्फोपेप्टाइड्सको संख्यामा 72% बृद्धि गर्न सक्षम बनायो d को मात्र ट्रिप्सिनसँग तुलना गर्दा, जबकि एक ट्रिप्सिन प्रतिकृति प्रयोगले मात्र 25% वृद्धि भएको थियो।तसर्थ, ट्रिप्सिन र Lys-N डाटामा मात्र ध्यान केन्द्रित गर्दा, हामीले 4671 nonredudent phosphopeptides पहिचान गर्यौं।पत्ता लगाइएका साइटहरूको थप विश्लेषणले देखायो कि Lys-N र trypsin डेटा सेटहरू महत्त्वपूर्ण रूपमा फरक फास्फोरिलेसन मोटिफहरूमा समृद्ध थिए, थप प्रमाण दिन्छ कि मल्टिप्रोटेज दृष्टिकोणहरू फस्फोप्रोटोम विश्लेषणहरूमा धेरै मूल्यवान छन्।