उत्पादनहरू

5-फ्लोरोरासिल (5-FU) र दुई अन्तर्जात मोनोफोस्फेट न्यूक्लियोटाइडहरूको धेरै मेटाबोलाइटहरू विशेष रूपमा परिमाण गर्न, हामीले तरल क्रोमेटोग्राफी-टेन्डम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (LC-MS/MS) मा आधारित मूल विधि विकास गर्यौं।यो परखले निम्न निर्धारण गर्न अनुमति दियो: (i) 5-FU वा 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) बाट 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) को इन्टरसेलुलर उत्पादन। , (ii) intracellular 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) अनुपातमा 5-FdUMP एकाग्रताको प्रभाव, र (iii) 5-FdUMP को स्राव सीमा र 5-FU एबीसी ट्रान्सपोर्टरहरू द्वारा मानव संस्कारित कोशिकाहरूबाट।हाम्रो प्रयोगात्मक अवस्थाहरूमा, कोशिकाहरू 5-FU वा 5-FUrd सँग इन्क्युबेटेड थिए।त्यसपछि, सेलुलर प्रोटिनहरू मेथेनोल द्वारा अवक्षेपित गरियो।यो प्रक्रियाले उच्च निकासी रिकभरी प्रदान गर्यो।थप रूपमा, कोशिकाहरूबाट 5-FU र 5-FdUMP स्राव मापन गर्न, हामीले संस्कृति माध्यममा यी अणुहरूको परिमाणीकरण गर्यौं।मिडिया या त सीधा इन्जेक्ट गरिएको थियो (5-FU) वा Oasis Wax Extract Cartridge (5-FdUMP) को प्रयोग गरी ठोस चरण निकासी अन्तर्गत गएको थियो।विश्लेषकहरूको पृथकीकरण dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) स्तम्भमा मोबाइल चरणको रूपमा अमोनियम ढाँचा बफर/मिथानोल/पानी (5/5/90, v/v) प्रयोग गरेर आइसोक्रेटिक मोडमा प्रदर्शन गरिएको थियो।रन टाइम 6.2 मिनेट भन्दा बढी थिएन।विश्लेषकहरू नकारात्मक आयन मोड अन्तर्गत इलेक्ट्रोस्प्रे इन्टरफेसमा आयनाइज गरिएको थियो।हामीले यौगिकहरू अनुसार 2.5-150 ng mL −1 को दायरामा विधि प्रमाणित गर्यौं।Intra- र inter-assay variability सात दिनमा 10% भन्दा कम थियो।सबै यौगिकहरू सेलहरूमा वा संस्कृति माध्यममा स्थिर थिए जब नमूनाहरू कम्तिमा दुई हप्ताको लागि −20 °C मा भण्डारण गरिएको थियो, र तीन फ्रिज-थाउ चक्र पछि।दुबै मिडियामा कुनै म्याट्रिक्स प्रभाव देखिएन।