उत्पादनहरू

युकेरियोटिक कोशिकाहरूमा चार डिओक्साइरिबोन्यूक्लियोसाइड ट्राइफोस्फेट (dNTPs) को मिनेट मात्राको नाजुक सन्तुलन हुन्छ, DNA प्रतिकृतिको केही मिनेटको लागि मात्र पर्याप्त हुन्छ।एकल dNTP को कमी र अधिशेष दुबैले उत्परिवर्तन दरहरू, दोषपूर्ण DNA मर्मत वा माइटोकोन्ड्रियल DNA कमी हुन सक्छ।dNTPs लाई सामान्यतया एक इन्जाइम्याटिक परख द्वारा परिमाण गरिन्छ जसमा रेडियोएक्टिभ dATP (वा dATP को लागि परखमा रेडियोएक्टिभ dTTP) को DNA पोलिमरेज द्वारा विशिष्ट सिंथेटिक ओलिगोन्यूक्लियोटाइडहरूमा सम्मिलित हुन्छ अज्ञात dNTP को एकाग्रतासँग समानुपातिक हुन्छ।हामीले पत्ता लगायौं कि सामान्यतया प्रयोग हुने Klenow DNA पोलिमरेजले अज्ञात dNTP को लागि सम्बन्धित रिबोन्यूक्लियोटाइडलाई प्रतिस्थापन गर्न सक्छ जुन केहि उदाहरणहरूमा dNTPs को ठूलो ओभरस्टिमेशनमा नेतृत्व गर्दछ।अब हामी प्रत्येक dNTP को लागि परख सर्तहरू वर्णन गर्छौं जसले रिबोन्यूक्लियोटाइड समावेशनबाट बच्न सक्छ।dTTP र dATP assess को लागि यो Klenow इन्जाइम र लेबल गरिएको dATP (वा dTTP) को सांद्रता कम गर्न पर्याप्त छ;dCTP र dGTP को लागि हामीले t he Klenow इन्जाइमलाई Taq DNA पोलिमरेज वा थर्मो सिक्वेनेजसँग प्रतिस्थापन गर्नुपर्ने थियो।हामी सुझाव दिन्छौं कि केही पहिलेका रिपोर्टहरूमा रिबोन्यूक्लियोटाइड समावेशले dGTP र dCTP को लागि धेरै उच्च मानहरू निम्त्याएको हुन सक्छ।