उत्पादनहरू

कोलिसिन E1 च्यानल डोमेनको झिल्ली टोपोलोजी फ्लोरोसेन्स अनुनाद ऊर्जा स्थानान्तरण (FRET) द्वारा अध्ययन गरिएको थियो।FRET ले दाताको रूपमा आनुवंशिक रूपमा एन्कोड गरिएको फ्लोरोसेन्ट एमिनो एसिड (कौमारिन) र FRET स्वीकारकर्ताको रूपमा DABMI (4-(dimethylamino) phenylazophenyl-4'-maleimide) सँग टेदर गरिएको सिस्टेन अवशेषहरू समावेश गरेको थियो।फ्लोरोसेन्ट कौमरिन अवशेषलाई ओर्थोगोनल tRNA/aminoacyl-tRNA सिन्थेटेज जोडी मार्फत प्रोटीनमा समावेश गरिएको थियो जसले कोलिसिन च्यानल डोमेन भित्र कुनै पनि साइटमा चयनात्मक समावेश गर्न अनुमति दिन्छ।प्रत्येक भेरियन्टले कूमारिन समावेशीकरणको लागि स्टप (TAG) उत्परिवर्तन र DABMI संलग्नको लागि सिस्टिन (TGT) उत्परिवर्तनलाई हार्बर गर्यो।हेलिकेस 1-6 भित्र छ वटा इन्टरहेलिकल दूरीहरू दुवै घुलनशील र झिल्ली-बाउन्ड अवस्थाहरूको लागि FRET विश्लेषण प्रयोग गरेर निर्धारण गरिएको थियो।FRET डेटाले झिल्ली एसोसिएशनमा हेलिकेस 3-6 बीचको अन्तरहेलिकल दूरीमा ठूलो परिवर्तनहरू देखायो जसले च्यानल डोमेनको झिल्ली-बाउन्ड संरचनामा नयाँ अन्तरदृष्टि प्रदान गर्दछ।सामान्यतया, coumarin-DABMI FRET इन्टरहेलिकल दक्षता झिल्ली बाइन्डिङमा घट्यो, कोलिसिन च्यानलको लागि छाता मोडेलमा निर्माण।च्यानल डोमेनको बन्द अवस्थाको लागि एक अस्थायी मोडेल हालको र पहिले प्रकाशित FRET डाटाको आधारमा विकसित गरिएको थियो।मोडेलले हेलिकेस 1-7 को बाह्य कोशिकाबाट घडीको दिशामा र हेलिकेस 1, 6, 7, र 10 को झिल्ली इन्टरफेसियल एसोसिएसन हेलिकेस 8 र 9 द्वारा बनेको केन्द्रीय ट्रान्समेम्ब्रेन हेयरपिनको वरिपरि गोलाकार व्यवस्था सुझाव दिन्छ।