उत्पादनहरू

एन्थ्रानिलिक एसिड र प्रतिदीप्ति पत्ता लगाउने साथ व्युत्पन्नमा आधारित ग्लाइकोसिलट्रान्सफेरेसहरूको लागि नयाँ उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमाटोग्राफी परख।

उच्च प्रदर्शन तरल द्वारा β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) र α2-6 sialyltransferase (ST-6) को गतिविधिहरू मापन गर्नको लागि 2-aminobenzoic एसिड (2AA; anthranilic एसिड, AA) को अद्वितीय लेबलिंग रसायन प्रयोग गरेर परखहरू विकसित गरिएको थियो। क्रोमैटोग्राफी (HPLC) प्रतिदीप्ति पत्ता लगाउने (Anumula KR। 2006। ग्लाइकोप्रोटीन कार्बोहाइड्रेटको उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफिक विश्लेषणको लागि प्रतिदीप्ति व्युत्पन्न विधिहरूमा अग्रिम। गुदा बायोकेम। 350:1-23)।N-Acetylglucosamine (GlcNAc) र N-acetyllactosamine क्रमशः GalT-1 र ST-6 को दाताहरूको रूपमा स्वीकारकर्ता र uridine diphosphate (UDP)-galactose र cytidine monophosphate (CMP)-N-acetylneuraminic एसिड (NANA) को रूपमा प्रयोग गरियो।इन्जाइम्याटिक उत्पादनहरू AA सँग स्थितिमा लेबल गरिएको थियो र TSKgel Amide 80 स्तम्भमा सामान्य-चरण अवस्थाहरू प्रयोग गरेर सब्सट्रेटहरूबाट अलग गरिएको थियो।इन्जाइम एकाइहरू शिखर क्षेत्रहरूबाट एकसाथ व्युत्पन्न मानकहरू Gal-β1-4GlcNAc र NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc सँग तुलना गरेर निर्धारण गरिएको थियो।Linearity (समय र इन्जाइम एकाग्रता), परिशुद्धता (intra- र interassay) र assays को लागि पुन: उत्पादन क्षमता स्थापित गरियो।परख अलगाव र शुद्धीकरणको समयमा इन्जाइम गतिविधिहरूको अनुगमन गर्न उपयोगी भएको पाइयो।परखहरू अत्यधिक संवेदनशील थिए र परम्परागत रेडियोएक्टिभ चिनी-आधारित मापन भन्दा बराबर वा राम्रो प्रदर्शन गरियो।परख ढाँचालाई अन्य स्थानान्तरणहरूको गतिविधि मापन गर्नका लागि पनि प्रयोग गर्न सकिन्छ, प्रदान गरिएको छ कि कार्बोहाइड्रेट स्वीकारकर्ताहरूले लेबलिङको लागि घटाउने अन्त समावेश गर्दछ।Glycoprotein स्वीकारकर्ताहरूको लागि एक परख IgG प्रयोग गरेर विकसित गरिएको थियो।IgG glycans (बियनटेनरी G0, G1, G2, mono- र disialylated) को पृथकीकरणको लागि छोटो HPLC प्रोफाइलिङ विधि विकसित गरिएको थियो, जसले GalT-1 र ST-6 गतिविधिहरूको द्रुत रूपमा निर्धारण गर्न सहज बनायो।यसबाहेक, यो प्रोफाइलिङ विधिले नैदानिक ​​​​सेटिङहरूमा IgG glycans मा परिवर्तनहरू निगरानी गर्न उपयोगी साबित गर्नुपर्छ।