उत्पादनहरू

कपोसीको सार्कोमा-सम्बद्ध herpesvirus (KSHV) को ORF45 प्रोटीन एक गामाहेरपेसभाइरस-विशिष्ट तत्काल-प्रारम्भिक टेग्युमेन्ट प्रोटीन हो।हाम्रा अघिल्ला अध्ययनहरूले KSHV संक्रमणको प्रारम्भिक र पछिल्लो चरणहरूमा यसको महत्त्वपूर्ण भूमिकाहरू प्रकट गरेका छन्।यस अध्ययनमा, हामीले मोनोक्लोनल एन्टिबडीहरूको प्यानल प्रयोग गरेर ORF45 को अन्तरक्रियात्मक सर्वेक्षण गर्यौं।पहिले पहिचान गरिएको एक्स्ट्रासेलुलर रेगुलेट किनेज (ERK) र p90 ribosomal S6 kinase (RSK) प्रोटिनहरूको अतिरिक्त, हामीले ∼38 kDa र ∼ 130 kDa को प्रमुखहरू सहित धेरै अन्य कपूरिफाइड प्रोटीनहरू भेट्टायौं।मास स्पेक्ट्रोमेट्रीले पत्ता लगायो कि 38-kDa प्रोटीन भाइरल ORF33 हो र 130-kDa प्रोटीन सेलुलर USP7 (ubiquitin-विशेष प्रोटीज 7) हो।हामीले ORF33-बाइन्डिङ डोमेनलाई ORF45 को उच्च संरक्षित कार्बोक्सिल-टर्मिनल 19 एमिनो एसिड (एए) र USP7-बाइन्डिङ डोमेनलाई ORF45 को केन्द्रीय क्षेत्रमा रिपोर्ट गरिएको सहमति मोटिफमा म्याप गर्यौं।इम्युनोफ्लोरेसेन्स स्टेनिङ प्रयोग गरेर, हामीले ORF45 को ORF33 वा USP7 दुबै ट्रान्सफेक्ट कन्डिट आयनहरू अन्तर्गत र KSHV-संक्रमित कोशिकाहरूमा कोलोकलाइजेशन देख्यौं।यसबाहेक, हामीले न्यूक्लियसबाट साइटोप्लाज्ममा ORF33/USP7 को एक भागको ORF45-निर्भर पुनर्स्थानीकरण देख्यौं।हामीले फेला पारेको छ कि ORF45 ले ORF33 प्रोटीन संचयमा वृद्धि गरेको छ जुन ORF45 मा ORF33- वा USP7- बाध्यकारी डोमेन मेटाइयो भने खारेज गरियो।यसबाहेक, KSHV जीनोममा ORF45 को संरक्षित कार्बोक्सिल टर्मिनस हटाउनाले KSHV-संक्रमित कोशिकाहरूमा ORF33 प्रोटिनको स्तरलाई एकदमै कम गर्यो र प्रोजेनी virions को उत्पादन समाप्त भयो।सामूहिक रूपमा, हाम्रा नतिजाहरूले ORF45 अन्तरक्रियाको नयाँ कम्पोनेन्टहरू मात्र प्रकट गर्दैन, तर KSHV lytic प्रतिकृतिको लागि यी प्रोटीनहरू बीचको अन्तरक्रियाहरू महत्त्वपूर्ण छन् भनेर पनि देखाउँछन्। Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) धेरै मानव क्यान्सरहरूको कारक एजेन्ट हो।KSHV ORF45 एक बहु-कार्यात्मक प्रोटीन हो जुन KSHV lytic प्रतिकृतिको लागि आवश्यक छ, तर ORF45 ले यसको महत्वपूर्ण कार्यहरू गर्ने सही संयन्त्र स्पष्ट छैन।हाम्रो अघिल्लो अध्ययनहरूले पत्ता लगायो कि कोशिकाहरूमा सबै ORF45 pr otein उच्च-आणविक-वजन परिसरहरूमा अवस्थित छ।त्यसकारण हामीले ORF45 को अन्तर्क्रियात्मक विशेषतालाई लिटिक प्रतिकृतिको समयमा यसको भूमिकाहरूमा अन्तर्दृष्टि प्रदान गर्न खोज्यौं।मोनोक्लोनल एन्टिबडीहरूको प्यानल प्रयोग गरेर, हामीले KSHV-संक्रमित कोशिकाहरूमा ORF45 अन्तरक्रियात्मक सर्वेक्षण गर्यौं।हामीले ORF45 को दुई नयाँ बाध्यकारी साझेदारहरू पहिचान गर्यौं: भाइरल प्रोटीन ORF33 र सेलुलर ubiquitin-विशेष प्रोटीज 7 (USP7)।हामी थप प्रदर्शन गर्छौं कि ORF45 र ORF33 बीचको अन्तरक्रिया KSHV भाइरल कणहरूको कुशल उत्पादनको लागि महत्त्वपूर्ण छ, सुझाव दिन्छ कि यस अन्तरक्रियाको साथ लक्षित हस्तक्षेपले KSHV lytic प्रतिकृतिलाई रोक्नको लागि उपन्यास रणनीति प्रतिनिधित्व गर्न सक्छ।