उत्पादनहरू

X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside को लागि संक्षिप्त BCIG) एक प्रतिस्थापित इन्डोलसँग जोडिएको ग्यालेक्टोज मिलेर बनेको जैविक यौगिक हो।यौगिक जेरोम होर्विट्ज र सहयोगीहरू द्वारा 1964 मा संश्लेषित गरिएको थियो। औपचारिक रासायनिक नाम प्रायः कम सटीक तर कम बोझिलो वाक्यांशहरू जस्तै ब्रोमोक्लोरोइन्डोक्सिल ग्यालेक्टोसाइडमा छोटो हुन्छ।Indoxyl बाट X X-gal संकुचनमा X को स्रोत हुन सक्छ।X-gal लाई प्रायः आणविक जीवविज्ञानमा प्रयोग गरिन्छ एक इन्जाइम, β-galactosidase, यसको सामान्य लक्ष्यको स्थानमा, β-galactoside को उपस्थितिको लागि परीक्षण गर्न।यो हिस्टोकेमिस्ट्री र ब्याक्टेरियोलोजीमा यो इन्जाइमको गतिविधि पत्ता लगाउन पनि प्रयोग गरिन्छ।X-gal धेरै इन्डोक्सिल ग्लाइकोसाइड र एस्टरहरू मध्ये एक हो जसले इन्जाइम-उत्प्रेरित हाइड्रोलाइसिसको परिणाम स्वरूप इन्डिगो डाई जस्तै अघुलनशील नीलो यौगिकहरू उत्पादन गर्दछ।

X-gal ल्याक्टोजको एनालॉग हो, र यसैले β-galactosidase इन्जाइम द्वारा हाइड्रोलाइज गरिएको हुन सक्छ जसले D-lactose मा β-glycosidic बन्ड क्लीभ गर्दछ।X-gal, β-galactosidase द्वारा क्लीभ गर्दा, ग्यालेक्टोज र 5-bromo- 4-chloro-3-hydroxyindole - 1. पछिको त्यसपछि सहज रूपमा डाइमेराइज हुन्छ र 5,5'-dibromo-4,4'-dichloro मा अक्सिडाइज हुन्छ। -indigo - 2, एक तीव्र नीलो उत्पादन जो अघुलनशील छ।X-gal आफैं रंगहीन छ, त्यसैले नीलो रंगको उत्पादनको उपस्थिति सक्रिय β-galactosidase को उपस्थितिको लागि परीक्षणको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।यसले ब्याक्टेरिया β-galactosidase (तथाकथित lacZ) लाई विभिन्न अनुप्रयोगहरूमा रिपोर्टरको रूपमा प्रयोग गर्न अनुमति दिन्छ।

दुई-हाइब्रिड विश्लेषणमा, β-galactosidase एकअर्कासँग अन्तरक्रिया गर्ने प्रोटीनहरू पहिचान गर्न रिपोर्टरको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।यस विधिमा, खमीर वा ब्याक्टेरिया प्रणाली प्रयोग गरेर प्रोटीन अन्तरक्रियाको लागि जीनोम पुस्तकालयहरू जाँच गर्न सकिन्छ।जहाँ प्रोटीनहरू स्क्रिन गरिँदैछ बीच सफल अन्तरक्रिया हुन्छ, यसले एक सक्रियता डोमेनलाई प्रमोटरमा बाँध्ने परिणाम दिन्छ।यदि प्रवर्द्धकलाई lacZ जीनसँग जोडिएको छ भने, β-galactosidase को उत्पादन, जसले X-gal को उपस्थितिमा निलो-पिग्मेन्टेड कोलोनीहरूको गठनमा परिणाम दिन्छ, त्यसैले प्रोटीनहरू बीचको सफल अन्तरक्रियालाई संकेत गर्दछ।यो प्रविधि लगभग 106 भन्दा कम आकारको स्क्रिनिङ पुस्तकालयहरूमा सीमित हुन सक्छ। X-gal को सफल क्लीभेजले इन्डोलको वाष्पीकरणको कारणले उल्लेखनीय रूपमा दुर्गन्ध पनि सिर्जना गर्दछ।

X-gal आफैं रङ्गहीन भएकोले, नीलो रंगको उत्पादनको उपस्थितिलाई सक्रिय β-galactosidase को उपस्थितिको लागि परीक्षणको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।

सक्रिय इन्जाइमको यो सजिलो पहिचानले βgalactosidase (lacZ जीन) को लागि जीनलाई विभिन्न अनुप्रयोगहरूमा रिपोर्टर जीनको रूपमा प्रयोग गर्न अनुमति दिन्छ।