उत्पादनहरू

एकसाथ उत्परिवर्तनका प्रभावहरू इन्जाइम्याटिक गतिविधि परिवर्तन गर्न संयोजन गर्ने तरिका सजिलै अनुमान गर्न सकिँदैन किनभने यी प्रभावहरू सधैं रैखिक तरिकामा थपिने छैनन्।तसर्थ, सब्सट्रेटलाई बाँध्ने एमिनो एसिड अवशेषहरूको एकसाथ उत्परिवर्तनको प्रभावहरूको विशेषताले इन्जाइमहरूको सब्सट्रेट विशिष्टताको समझमा महत्त्वपूर्ण योगदान दिन सक्छ।Spodoptera frugiperda (Sfbetagly) को beta-glycosidase मा, Q39 र E451 दुबै अवशेषहरूले सब्सट्रेटसँग अन्तरक्रिया गर्दछ र यो सब्सट्रेट विशिष्टता परिभाषित गर्न आवश्यक छ।Sfbetagly (A451E39, S451E39 र S451N39) को डबल म्युटेन्टहरू साइट-निर्देशित म्युटाजेनेसिस द्वारा तयार गरिएको थियो, ब्याक्टेरियामा व्यक्त गरिएको थियो र एफिनिटी क्रोमेटोग्राफी प्रयोग गरेर शुद्ध गरियो।यी इन्जाइमहरू p-nitrophenyl beta-galactoside र p-nitrophenyl beta-fucoside को सब्सट्रेटको रूपमा प्रयोग गरी विशेषता थिए।Q39 र E451 स्थानहरूमा साइट-निर्देशित उत्परिवर्तनहरू समावेश गर्ने Sfbetagly को एकल र दोहोरो उत्परिवर्तनहरूको k cat/Km अनुपात दोहोरो उत्परिवर्तन (Gdouble) को ESdouble ड्यागर (इन्जाइम-ट्रान्जिसन स्टेट कम्प्लेक्स) को मुक्त ऊर्जामा प्रभाव छ भनेर प्रदर्शन गर्न प्रयोग गरिएको थियो। daggerxy) एकल उत्परिवर्तन (Gdouble daggerx र Gdouble daggery) बाट उत्पन्न प्रभावहरूको योग होइन।Gdouble Dagger मा यो भिन्नताले संकेत गर्दछ कि एकल उत्परिवर्तनको प्रभाव आंशिक रूपमा ओभरल्याप हुन्छ।यसैले, यो सामान्य प्रभाव Gdouble daggerxy मा एक पटक मात्र गणना हुन्छ।Beta-glycosidases मा क्रिस्टलोग्राफिक डेटाले Q39 र E451 अवशेषहरू र सब्सट्रेटको समान हाइड्रोक्सिल समूह समावेश गर्ने बिडेन्टेट हाइड्रोजन बन्डको उपस्थिति प्रकट गर्दछ।तसर्थ, दुबै थर्मोडायनामिक र क्रिस्टलोग्राफिक डेटाले Q39 र E451 अवशेषहरूले सब्सट्रेटसँग सम्बन्धित अन्तरक्रियाहरूमा पारस्परिक प्रभाव पार्ने सुझाव दिन्छ।