उत्पादनहरू

मानव आन्द्रा सिम्बियोन्टमा अल्फा-म्याननोसिडेसेसको Ca2+-निर्भर परिवारमा मेकानिस्टिक अन्तर्दृष्टि।

कोलोनिक ब्याक्टेरिया, ब्याक्टेरोइड्स thetaiotaomicron द्वारा उदाहरण, ग्लाइकोसाइड हाइड्रोलासेस (GHs) को ठूला परिवारहरूलाई आहार पोलिसेकराइडहरू शोषण गर्न र पोषक तत्वहरूको रूपमा ग्लाइकानहरू होस्ट गरेर मानव स्वास्थ्य कायम राख्नमा महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्छ।यस्तो GH परिवार विस्तार B. thetaiotaomicron जीनोम द्वारा इन्कोड गरिएको 23 परिवार GH92 glycosidases द्वारा उदाहरण हो।यहाँ हामी देखाउँछौं कि यी अल्फा-म्यानोसिडेसहरू हुन् जसले होस्ट N-glycans प्रयोग गर्न एकल विस्थापन संयन्त्र मार्फत कार्य गर्दछ।दुई GH92 mannosidases को त्रि-आयामी संरचनाले दुई-डोमेन प्रोटीनहरूको परिवार परिभाषित गर्दछ जसमा उत्प्रेरक केन्द्र डोमेन इन्टरफेसमा अवस्थित छ, एसिड (ग्लुटामेट) र आधार (एस्पार्टेट) एक Ca(2+)- मा हाइड्रोलाइसिस गर्न सहायता प्रदान गर्दछ। निर्भर तरिका।अवरोधकहरूसँग जटिलमा GH92s को त्रि-आयामी संरचनाहरूले उत्प्रेरकको विशिष्टता, संयन्त्र र संरचनात्मक यात्रा कार्यक्रममा अन्तरदृष्टि प्रदान गर्दछ।Ca(2+) ले म्याननोसाइडलाई यसको ग्राउन्ड-स्टेट (4)C(1) कुर्सी कन्फर्मेसन बाट ट्रान्जिसन स्टेट तर्फ विकृत गर्न मद्दत गर्नमा प्रमुख उत्प्रेरक भूमिका खेल्छ। (Bibliography: Nat।रसायन।Biol।६, १२५-३२, (२०१०)

कन्कानाभालिन ए-सेफेरोज स्तम्भमा ओभलब्युमिन ग्लाइकोस्पारागाइनको फ्रन्टल एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी।लेक्टिनको बाध्यकारी विशिष्टताको मात्रात्मक अध्ययन।

सेफारोज 4B-इमोबिलाइज्ड कन्कानाभालिन A (ConA) को अन्तरक्रियाहरू ओभालब्युमिनबाट व्युत्पन्न 10 ग्लाइकोस्पारागिनहरूसँग फ्रन्टल एफिनिटी क्रोमेटोग्राफी द्वारा मात्रात्मक रूपमा अनुसन्धान गरियो।यस विधिमा, एक कार्बोहाइड्रेट समाधान लगातार ConA-Sepharose स्तम्भमा लागू गरिन्छ र इल्युसन फ्रन्टको रिटार्डेसनलाई अन्तरक्रियाको शक्तिको प्यारामिटरको रूपमा मापन गरिन्छ।ConA सँग प्रत्येक saccharide को लागि पृथक स्थिरता (Kd) निर्धारण गर्न सकिन्छ।p-nitrophenyl-alpha, D-mannoside को बाइन्डिङको विश्लेषणले देखाएको छ कि ConA को बाध्यकारी गुणहरू Sepharose 4B मा स्थिरता पछि परिवर्तन हुँदैन।प्रत्येक ओभाल्बुमिन ग्लाइकोस्पारागाइनलाई विश्लेषणको लागि घटाउने मेथिलेसन विधिद्वारा ट्रिटियमको साथ लेबल गरिएको थियो।प्राप्त Kd मानहरूको तुलनाले देखाएको छ कि ConA को बाइन्डिङ ग्लाइकोसिल चेनको धेरै थोरै संरचनात्मक भिन्नताहरूसँग धेरै फरक हुन्छ।नतिजाहरूले सुझाव दिन्छ कि ConA ले एक विशिष्ट ग्लाइकोसिल चेन संरचना, म्यान अल्फा 1-6 (म्यान अल्फा 1-3) म्यान पहिचान गर्दछ, जसमा C-6-लिङ्क गरिएको म्यानोजको C-3 स्थितिमा कम्तिमा एउटा हाइड्रोक्सिल समूह स्वतन्त्र हुनुपर्छ।